Forschungslabor

Harnblasen-Organoide als 3D-Modellsysteme für die nicht-maligne Harnblase

Urinary bladder organoids as 3D model systems for the non-malignant bladder

Organoide sind vielversprechende Modellsysteme in der biomedizinischen Grundlagenforschung. Die Effizienz der Herstellung von Patienten-abgeleiteten Harnblasen-Organoiden ist jedoch gering. Daher haben wir Harnblasen-Organoide aus kommerziell verfügbaren humanen Harnblasenzellen (Urothelzellen, Fibroblasten und glatten Muskelzellen) etabliert, die die Komplexität der Harnblasenhistologie nachbilden und Untersuchungen von pharmakologischen Effekten auf einzelne Zelltypen und Zell-Zell-Interaktionen erlauben. Die organotypische Selbstorganisation und der Verbleib der einzelnen Zelltypen in den Organoiden kann im Live Cell Imaging visualisiert, und die Expression spezifischer Marker immunhistologisch/ molekularbiologisch nachgewiesen werden. Mittels Elektronenmikroskopie werden zudem typische interzelluläre Kontakte zwischen den Urothel- und/oder Stromazellen untersucht. Stimulationsexperimente mit Rezeptoragonisten/-antagonisten erlauben darüber hinaus die Analyse der Rezeptorregulation im Epithel und Stroma der Organoide. Damit steht ein komplexes 3D-Modellsystem für die urologische Grundlagenforschung zur Verfügung.

Organoids are promising model systems in basic biomedical research and can be used for pharmacological therapy screenings. However, the efficiency of patient-derived urinary bladder organoid generation is still low. We use commercially available human bladder cells (urothelial cells, fibroblasts, smooth muscle cells) to generate organoids mimicking the complexity of the bladder histology. Those organoids allow the analysis of cell-cell interactions and pharmacological effects at individual cells. We visualize self-organization and fate of the individual cell types by live cell imaging, and detect the expression of specific markers using immunohistochemistry and molecular biology. Electron microscopy is used to examine typical intercellular contacts between urothelial and/or stromal cells. In addition, stimulation experiments with receptor agonists/antagonists allow the analysis of receptor regulation in the epithelium and stroma of the organoids. Thereby, this 3D model system may become a versatile tool in basic urological research.  

Förderung (Funding)

Wissenschaftsstiftung Leipzig, Markleeberg

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Nachbildung der Tumor-Mikroumgebung in rekonstruierten Tumor-Stroma-Organoiden des Harnblasenkarzinoms

​Modelling of the tumor microenvironment in reconstructed tumor-stroma organoids of bladder carcinoma

Die zellulären Interaktionen in der Mikroumgebung (TME) des Tumors bestimmen maßgeblich die Tumorprogression und den Therapieerfolg. Tumorzellen vermitteln die Differenzierung von Fibroblasten zu Tumor-assoziierten Fibroblasten und sezernieren Botenstoffe, welche die Endothelzell-Proliferation anregen oder modulatorisch auf Immunzellen einwirken. Zur Evaluierung neuer Anti-Tumor-Therapien stieg der Bedarf an robusten experimentellen Zellkultur-Systemen, welche den zellulären Crosstalk im TME besser nachbilden. Das Projekt zielt auf die Entwicklung eines rekonstruierten Organoidmodells für das Harnblasenkarzinom, bestehend aus Tumorzellen und verschiedenen Stromazellen (Fibroblasten, Muskelzellen, Endothelzellen, Immunzellen). Dabei werden die Organoide hinsichtlich ihrer Struktur, Differenzierung (z.B. zelluläre Subtypen), und der Tumorzell-Stroma-Interaktionen bzw. der interzellulären Kommunikation charakterisiert. Die Ausbildung eines vaskulären Netzwerkes wird mittels 3D konfokaler Laserscanningmikroskopie untersucht. Weiterhin soll geprüft werden, welchen Einfluss die zunehmende Organoid-Komplexität auf den Therapieerfolg neuer Anti-Tumor-Therapien bzw. Standard-of-care-Therapien (Chemotherapie) hat.

 

The cellular interactions within the tumor microenvironment (TME) significantly determine tumor progression and therapeutic success. Tumor cells mediate the differentiation of fibroblasts into tumor-associated fibroblasts, and secrete molecules that stimulate endothelial cell proliferation or have a modulatory effect on immune cells. Thus, there is an increased need for robust experimental cell culture systems that better mimic the cellular crosstalk within the TME. The project aims to develop a reconstructed organoid model for bladder cancer, consisting of tumor cells and various stromal cells (fibroblasts, muscle cells, endothelial cells, immune cells). The organoids will be characterized in terms of their structure, differentiation (e.g. cellular subtypes), and tumor cell-stroma interactions or intercellular communication. The formation of a vascular network will be examined using 3D confocal laser scanning microscopy. Furthermore, the influence of increasing organoid complexity on the therapeutic success of new anti-tumor therapies or standard-of-care therapies (chemotherapy) will be investigated.

Förderung (Funding)
Wissenschaftsstiftung Leipzig, Markleeberg; Dr. Siegfried Krüger-Stiftung, Leipzig

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Ein immunkompetentes, orthotopes Ratten-Harnblasenkarzinom-Modell zur Evaluierung neuer, minimal-invasiver Anti-Tumor-Therapien

An immunocompetent, orthotopic rat bladder cancer model for the evaluation of novel minimally invasive tumor therapies

Das orthotope Harnblasenkarzinom in der Ratte ist ein gut charakterisiertes, voll immunkompetentes Modell zur Untersuchung der Effekte neuer Anti-Tumortherapien. In diesem Modell werden Ratten-Harnblasentumorzellen (Zelllinie AY-27) direkt in die Harnblasen weiblicher F344 Fischer-Ratten instilliert. Nach Inokulation entstehen innerhalb von 14 Tagen Harnblasentumore von unterschiedlicher Ausdehnung und Invasivität (submukös, muskulär), welche geeignete Modelle für die Testung neuer Anti-Tumor-Therapien darstellen. Nach verschiedenen Zeitintervallen kann das Tumorwachstum bzw. der Therapieerfolg mittels Sonografie, Makroskopie und histologischer/mikroskopischer Aufarbeitung evaluiert werden. Das Tumor Staging erfolgt in Kooperation mit dem Institut für Pathologie, Universität Leipzig. Damit steht ein reproduzierbares, komplexes in vivo-Modell für die Untersuchung der (v.a. multimodalen) Effekte neuer Tumortherapien zur Verfügung.

The orthotopic rat bladder cancer model is a well-characterized, fully immunocompetent model for investigating the effects of new anti-tumor therapies. In this model, rat bladder tumor cells (cell line AY-27) are instilled directly into the bladders of female F344 Fischer rats. After inoculation, bladder tumors of varying size and invasiveness (submucosal, muscular) develop within 14 days, providing suitable models for new therapeutic studies. Tumor growth and treatment success can be comprehensively evaluated using sonography, macroscopy, and histological/microscopic analysis. Tumor staging is realized in cooperation with the Institute of Pathology, Leipzig University. This provides a reproducible, complex in vivo model for investigating the (primarily multimodal) effects of new tumor therapies.

Analyse der molekularen Mechanismen von Wnt/β-Catenin und seinen Co-Aktivatoren BCL9 und BCL9L in humanen Harnblasentumorzellen

Analysis of the molecular mechanisms of Wnt/β-catenin and its co-activators BCL9 and BCL9L in human bladder cancer cells

Bei der Progression vieler Tumorerkrankungen spielt der Wnt/b-Catenin Signalweg eine wichtige Rolle. Auch für das Urothelkarzinom wurde bisher gezeigt, dass b-Catenin signifikant überexprimiert ist und mit dem Tumorstadium und -grad sowie schlechterer Prognose korreliert. Ziel des Projektes ist die Untersuchung des Einflusses der b-Catenin Ko-Faktoren BCL9/BCL9L auf Wachstum und Invasivität der Tumorzellen sowie der regulierten Signalwege. Das Projekt wird in Kooperation mit den Forschungsgruppen in Jena und Rostock bearbeitet (Gesamtprojektleiter: Dr. Daniel Steinbach, Klinik für Urologie, Universitätsklinikum Jena; Dr. Roland Kotolloshi, Klinik und Poliklinik für Urologie, Universitätsmedizin Rostock). BCL9/BCL9L Knockdown- oder Expressionszelllinien werden durch lentiviralen shRNA- bzw. Gentransfer erzeugt, und die Effekte auf Tumorwachstum, Invasivität und funktionelle Marker des Wnt/b-Catenin Signalweges bzw. der epithelialen-mesenchymalen Transition im Organoidmodell untersucht. Darüber hinaus sollen erste therapeutische Versuche mit spezifischen BCL9- bzw. BCL9L-Inhibitoren in Zellkultur durchgeführt werden.

​The Wnt/b-catenin signaling pathway plays an important role in the progression of many tumor diseases. For urothelial carcinoma, it has also been shown that b-catenin is significantly overexpressed and correlates with tumor stage, grading and poor prognosis. The aim of the project is to investigate the influence of the b-catenin co-factors BCL9/BCL9L on the growth and invasiveness of tumor cells, as well as the associated signaling pathways. The project will be realized in cooperation with the research groups in Jena and Rostock (overall project heads: Dr. Daniel Steinbach, Department of Urology, Jena University Hospital; Dr. Roland Kotolloshi, Department of Urology, Rostock University Hospital). BCL9/BCL9L knockdown or expression cell lines will be generated by lentiviral shRNA or gene transfer, and the effects on tumor growth, invasiveness, and functional markers of the Wnt/β-catenin signaling pathway or epithelial-mesenchymal transition will be investigated in the organoid model. In addition, initial experiments with specific BCL9 or BCL9L inhibitors will be performed under cell culture conditions.

Entwicklung von Nanodiamant-basierten Drug delivery- und Quantensensor-Systemen zur Behandlung urologischer Tumore

Development of nanodiamond-based drug delivery and quantum sensor systems for the treatment of urological tumors

​Das Projekt wird in Kooperation mit der Forschungsgruppe „Biosensorische Nanopartikel und Oberflächen“ des Leibnitz-Instituts für Oberflächenmodifizierung, Leipzig bearbeitet (Gesamtprojektleiter: Dr. Christian Laube).

Individualisierte Therapien gewinnen in der Onkologie zunehmend an Bedeutung. Als ein vielversprechender Ansatz haben sich Farbzentren-haltige, oberflächenmodifizierte Nanodiamanten (ND) herauskristallisiert, deren Funktionalisierung die Anbindung von Liganden/Antikörpern, Medikamenten (z.B. Zytostatika) und Sensormolekülen ermöglicht. Ihr Vorteil liegt in der niedrigen Toxizität und der Nutzung der Oberfläche als Reaktionsmatrix. Dieser Ansatz erlaubt eine Liganden/Antikörper-vermittelte Aufnahme der NDs in die jeweiligen Tumorzellen und führt zu einer Tumor-selektiven Wirkung der gekoppelten Zytostatika. Die integrierten Farbzentren ermöglichen darüber hinaus quantensensorische Messungen von Temperatur und reaktiven chemischen Spezies im Gewebe, beides Frühindikatoren für die Gewebeveränderungen und Therapiewirksamkeit. Die Möglichkeit der Hyperpolarisation mit Stickstoff-Vakanz-Zentren bietet zudem die Bildgebung der ND-Drug/Sensor-Konjugate im MRT. Kritische Anwendungsparameter (z.B. Medikamententransport, Wirkstoffverteilung und -wirksamkeit) können damit in Echtzeit beobachtet werden. Ziel des Projektes ist die Entwicklung und zelluläre Testung von funktionalen NDs für die personalisierte Diagnostik und Therapie („Theranostik“) urologischer Tumore.

The project is realized in collaboration with the research group “Biosensory Nanoparticles and Surfaces" at the Leibniz Institute for Surface Modification in Leipzig (overall project head: Dr. Christian Laube).

Individualized therapies have become increasingly important in oncology. Surface-modified nanodiamonds (ND) containing fluorescent centers have emerged as a promising approach, as their functionalization allows the binding of ligands or antibodies, drugs and sensor molecules. Their advantage lies in their low toxicity and the use of the surface as a reaction matrix. This approach enables ligand/antibody-mediated targeting of tumor cells and leads to a tumor-selective effect of the coupled cytostatic drugs. The integrated fluorescent centers also facilitate quantum-sensory measurements of temperature and reactive chemical species in tissues, both of which are early indicators of pathological changes and therapeutic efficacy. The possibility of hyperpolarization with nitrogen vacancy centers also allows imaging of the ND drug/sensor conjugates in MRI. Critical application parameters (e.g., drug transport, distribution, and efficacy) can thus be monitored in real time. The aim of the project is the development and in vitro evaluation of functional NDs for personalized diagnosis and treatment of urological tumors.

Photodynamische Therapie und Ionisierende Strahlung – ein multimodaler Ansatz zur effektiven Behandlung des Harnblasenkarzinoms

Photodynamic Therapy and Ionizing Radiation – A Combined Approach for Effective Treatment of Bladder Carcinoma

Die Photodynamische Therapie (PDT) in Kombination mit Ionisierender Strahlung (IR) ist ein vielversprechender Ansatz zur multimodalen, immunstimulatorischen Anti-Tumor-Behandlung. Das Projekt wird in Kooperation mit der Forschungsgruppe der Klinik und Poliklinik für Strahlentherapie (Dr. Annegret Glasow, Dr. Ina Patties) umgesetzt und soll den Nutzen der PDT in Kombination mit IR zur effektiven Therapie des Harnblasenkarzinoms in vitro und in vivo untersuchen. Für die PDT werden Farbstoffe genutzt, die im langwelligen Bereich angeregt werden können (near-infrared Photosensibilisatoren, z.B. THPTS). Versuche in humanen Organoiden zeigten bereits synergistische, tumorselektive zytotoxische Effekte der IR+PDT, ausgelöst via Apoptose, Nekroptose, und/oder Pyroptose. Die Evaluierung von Sicherheit und Effektivität erfolgt im orthotopen Rattenmodell. Dabei werden verschiedene Behandlungsregime (einmalig vs. dreimalig; Kombinationstherapie vs. Monotherapie) angewendet und die Effekte auf das Gesamtüberleben, das Therapieansprechen und die Immunstimulation analysiert. Die IR+PDT könnte eine minimal-invasive, effektive Behandlung des Harnblasenkarzinoms ermöglichen.

Entwicklung von Wirkstoff (siRNA) - freisetzenden Harnleiterstents zur lokalen Behandlung von Harnleitertumoren

Development of drug (siRNA) – eluting ureteral stents for local treatment of ureter carcinoma

Das Projekt wird in Kooperation mit der Forschungsgruppe der Pharmazeutischen Technologie (Prof. Dr. Michaela Schulz-Siegmund, Dr. Christian Wölk) am Institut für Pharmazie, Universität Leipzig umgesetzt. Ziel des Vorhabens ist die Konzeption eines Arzneistoff-beladenen Harnleiterstents für die lokale Behandlung von Harnleitertumoren. Der vorgestellte Ansatz soll zur Rezidiv-Prävention von niedrig-gradigen Harnleitertumoren genutzt werden. Der Stent als Arzneistoff-Freigabesystem soll am Ort eines zuvor ablatierten Tumors platziert werden, um dort über einen längeren Zeitraum tumorspezifische small interfering RNA (siRNA) als Wirkstoff freizugeben. Es sollen Nitinolstents eingesetzt werden, die auf der Innen- und Außenseite mit einem hydrophilen Polymer umhüllt werden. Die Außenseite soll anschließend mit einer Polyelektrolytmultischicht als siRNA-Reservoir beschichtet werden, welches im engen Kontakt zum Harnleiter-Epithel mit verbliebenen Tumorzellen steht. Die siRNA aus dem Reservoir wird dann zellgesteuert freigesetzt und in Form von Lipidnanopartikeln effektiv in Zellen eingeschleust. Auf diese Weise sollen spezifische Onkogene stillgelegt und verbliebene Tumorzellen abgetötet werden, während benachbarte gesunde Zellen unberührt bleiben.

The project is realized in collaboration with the research group of the Pharmaceutical Technology (Prof. Dr. Michaela Schulz-Siegmund; Dr. Christian Wölk), Institute for Pharmacy, Leipzig University. The aim of the project lies in the conception and design of a drug-loaded stent for local, post-operative treatment of tumors of the ureter. Low-risk ureteral tumors can be removed by minimally invasive laser ablation of the tumor tissue. However, with this treatment, there is a high risk of remaining tumor cells that lead to a recurrence of the tumor. Prevention of such relapses is the objective of the funded project. The drug-eluting stent is projected to be placed in the location of the tumor that is ablated beforehand. The stent will continuously release tumor-specific small interfering RNA as its drug component. It is intended to use metal stents that are coated on the in- and outside with a newly developed hydrophilic polymer. A siRNA-reservoir is then applied to the coated stent and forms the contact area with the ureter epithelium and any remaining tumor cells. Lipoplexes of the siRNA that are embedded in the reservoir are intended as an effective delivery system. In this way, specific oncogenes will be silenced and the tumor cells will be suppressed, whereas adjacent, healthy cells will not be touched.

Förderung (Funding)
EFRE InfraProNet 2021-2027

Rezeptorexpressionsanalysen bei Interstitieller Zystitis

Receptor expression profiling in interstitial cystitis​

​Die IC/BPS ist eine schwere Erkrankung der Harnblase, die bislang unverstanden ist und für die nur sehr begrenzte Behandlungsoptionen zur Verfügung stehen. Wir untersuchen die Expression und Verteilung von verschiedenen Rezeptoren in humanen Gewebeproben mit histologischen und molekularbiologischen Methoden (Immunofluoreszenz und Real-time quantitative PCR).
Wir haben zudem eine fluoreszenztechnische Methode etabliert (PLA, proximity ligation assay), die den Nachweis von Protein-Protein-Interaktionen und Kolokalisation in fixiertem Gewebe erlaubt und nutzen diese Methode um Einblicke in das Rezeptor-Trafficking innerhalb von Harnblasenzellen zu gewinnen. Ziel der Forschung ist das bessere Verständnis der Etiologie und Pathologie der IC/BPS und die Suche nach einem neuen Behandlungsansatz.

IC/BPS is a severe and poorly understood disorder of the urinary bladder for which only limited therapeutic options are currently available. In this study, we analyze the expression and spatial distribution of various receptors in human tissue samples using histological and molecular biological techniques, including immunofluorescence and real-time quantitative PCR.
Furthermore, we have established a fluorescence-based proximity ligation assay (PLA) that enables the detection of protein–protein interactions and receptor colocalization in fixed tissue. This approach is applied to investigate receptor trafficking processes within bladder cells. The overall aim of this research is to improve the understanding of the etiology and pathology of IC/BPS and to identify potential novel therapeutic targets.​

Als ​Liquid Biopsy werden neue Biomarker genannt, die eine Analyse aus Flüssigkeiten (z.B. Urin, Blut oder Seminalplasma) erlauben.

Urin kann vollständig nicht-invasiv gewonnen werden und ist reich an Metaboliten, Proteinen und Peptiden, die die Grundlage für die Entwicklung von Biomarkern für verschiedene urologische und andere Erkrankungen bilden können. Wir suchen mit einer interdisziplinären Forschergruppe nach Biomarker-Signaturen für das Harnblasenkarzinom, das Prostatakarzinom und die IC / BPS.

Zum Nachweis von kleinen Peptiden (<17kDa) haben wir die CE-MS (Capillary Electrophoresis-Mass spectroscopy) verwendet und entdeckten aussichtsreiche Peptidmuster sowohl für das Harnblasenkarzinom aus Urin als auch für das Prostatakarzinom aus Seminalplasma. In neueren Arbeiten verwenden wir zum Nachweis von Metaboliten die ¹H-NMR (Proton nuclear magnetic resonance spectroscopy) mit der sich über tausend Metabolite im Urin und im Blut nachweisen lassen. Durch den Vergleich mit gesunden Probanden bzw. mit anderen Patientengruppen, lassen sich Muster erarbeiten, die für die Erkrankung oder den Krankheitsverlauf spezifisch sind. Damit können solche Biomarker-Signaturen dabei helfen, die Erkrankung frühzeitig zu erkennen oder den Krankheitsverlauf vorauszusagen und können so eine auf den Patienten individuell zugeschnittene Therapie ermöglichen.

Publikationen (Auswahl):

• Neuhaus J, Yang B. Liquid Biopsy Potential Biomarkers in Prostate Cancer. Diagnostics. 2018; 8:68. doi:10.3390/diagnostics8040068.
• Yang B, Liao GQ, Wen XF, Chen WH, Cheng S, Stolzenburg JU, Ganzer R, Neuhaus J. Nuclear magnetic resonance spectroscopy as a new approach for improvement of early diagnosis and risk stratification of prostate cancer. J Zhejiang Univ Sci B. 2017; 18:921-933. doi:10.1631/jzus.B1600441.
• Neuhaus J, Schiffer E, Mannello F, Horn LC, Ganzer R, Stolzenburg JU. Protease Expression Levels in Prostate Cancer Tissue Can Explain Prostate Cancer-Associated Seminal Biomarkers-An Explorative Concept Study. Int J Mol Sci. 2017; 18doi:10.3390/ijms18050976.
• Neuhaus J, Schiffer E, von W, Philine, Bauer HW, Leung H, Siwy J, Ulrici W, Paasch U, Horn L-C, Stolzenburg JU. Seminal Plasma as a Source of Prostate Cancer Peptide Biomarker Candidates for Detection of Indolent and Advanced Disease. PLoS ONE. 2013; 8:e67514. doi:doi:10.1371/journal.pone.0067514.
• Schiffer E, Vlahou A, Petrolekas A, Stravodimos K, Tauber R, Geschwend JE, Neuhaus J, Stolzenburg JU, Conaway MR, Mischak H, Theodorescu D. Prediction of muscle-invasive bladder cancer using urinary proteomics. Clin Cancer Res. 2009; 15:4935-4943. doi:10.1158/1078-0432.CCR-09-0226.

Obwohl die Harnblase seit vielen Jahren intensiv erforscht wird sind viele Details noch ungeklärt. So sind bislang nicht alle Zelltypen hinreichend charakterisiert, die in ihrem Zusammenspiel ein einwandfreies Funktionieren der Harnblase und des UHT ermöglichen. Dementsprechend sind auch noch zahlreiche Fragen hinsichtlich der Physiologie und der Pathophysiologie offen. Unsere Arbeitsgruppe erforscht seit vielen Jahren die Anatomie und Histologie des UHT und hat so wichtige Erkenntnisse zur Funktion des muskulären Verschlußapparates der Harnblase und der Urethra erzielen können. Diese Erkenntnisse sind direkt in die operativen Techniken z.B. der radikalen Prostatektomie und Zystektomie eingeflossen.

In neueren Arbeiten haben wir die Feinstruktur der Harnblase bis hin zur 3D-Elektronenmikroskopischen Analyse untersucht. Wir konnten die interstitiellen Zellen der Harnblase immunhistochemisch charakterisieren und auch Besonderheiten in ihrer Morphologie auf ultrastrukturellem Niveau aufzeigen.

Publikationen (Auswahl):

• Neuhaus J, Schröppel B, Dass M, Zimmermann H, Wolburg H, Fallier-Becker P, Gevaert T, Burkhardt CJ, Do HM, Stolzenburg JU. 3D-electron microscopic characterization of interstitial cells in the human bladder upper lamina propria. Neurourol Urodyn. 2018; 37:89-98. doi:10.1002/nau.23270.
• Steiner C, Gevaert T, Ganzer R, De Ridder D, Neuhaus J. Comparative immunohistochemical characterization of interstitial cells in the urinary bladder of human, guinea pig and pig. Histochem Cell Biol. 2018; doi:10.1007/s00418-018-1655-z.
• Gevaert T, Neuhaus J, Vanstreels E, Daelemans D, Everaerts W, Der Aa FV, Timmermans JP, Roskams T, Steiner C, Pintelon I, De Ridder D. Comparative study of the organisation and phenotypes of bladder interstitial cells in human, mouse and rat. Cell Tissue Res. 2017; 370:403-416. doi:10.1007/s00441-017-2694-9.
• Gevaert T, Ridder D, Vanstreels E, Daelemans D, Everaerts W, Aa FV, Pintelon I, Timmermans JP, Roskams T, Steiner C, Neuhaus J. The stem cell growth factor receptor KIT is not expressed on interstitial cells in bladder. J Cell Mol Med. 2017; 21:1206-1216. doi:10.1111/jcmm.13054.
• Neuhaus J, Weimann A, Stolzenburg JU, Dawood W, Schwalenberg T, Dorschner W. Histamine receptors in human detrusor smooth muscle cells: physiological properties and immunohistochemical representation of subtypes. World J Urol. 2006; 24:202-209.
• Neuhaus J, Weimann A, Stolzenburg JU, Wolburg H, Horn LC, Dorschner W. Smooth muscle cells from human urinary bladder express connexin 43 in vivo and in vitro. World J Urol. 2002; 20:250-254.
• Dorschner W, Stolzenburg JU, Neuhaus J. Structure and function of the bladder neck. Adv Anat Embryol Cell Biol. 2001; 159:I-XII, 113 p.